Tinción Gram
l. Coloque la muestra sobre el porta objetos y distribuyala.
2. Fije la muestra por secado, pasandolo sobre un mechero. El paso del portaobjetos sobre la llama del mechero debe ser rápido, repita hasta que este seca la muestra. La temperatura del porta debe ser la que soporta el dorso de la mano sin quemarla
2. Coloque unas gotas del colorante violeta de genciana, cubriendo la extensión; el tiempo de actuación del colorante es de dos minutos.
3. Lave con agua destilada para arrastrar el colorante.
4. Ponga solución de lugol durante un minuto.
5. Lave nuevamente con agua destilada.
6. Decolore con unas gotas de alcohol de 96°, que debe actuar de 30 segundos a un minuto, para arrastrar el colorante que queda libre.
7. Lave cuidadosamente con agua destilada.
8. Agregue unas gotas de safranina durante un minuto.
9. Lave con agua destilada.
10. Seque al aire.
11. Agregue aceite de inmersión y observe a 100X
Las bacterias Gram positivas aparecen en visión microscópica teñidas de un color morado intenso, por la violeta de genciana.
Las bacterias Gram negativas, aparecen en visión microscópica teñidas de un color sonrosado débil, por la safranina.
a) Se arranca del suelo una planta de leguminosa con sus raíces. En las raicillas finas se verán unos nódulos en forma de pequeñas verrugas. Con las pinzas se desprende un nódulo. Se lava para quitarle la arena. El nódulo se parte con el bisturi sobre un portaobjetos agregando una gota de agua. Se quitan los residuos del nódulo, secando la preparación a la llama del mechero, se coloca el portaobjetos en el soporte de tinciones y se tiñe según la técnica de Gram.
b) Con la aguja de disección se toma una pequeña porción de yoghurt. Se disuelve en una gota de agua y se hace una extensión sobre el portaobjetos. Se lava 1a preparación, dejando caer con un cuentagotas unas gotas de la mezcla alcohol-cloroformo para arrastrar las gotas de grasa del yoghurt y se deja secar al aire. Se coloca el portaobjetos en el soporte de tinciones y se tiñe según la técnica de Gram.
c) Disuelva en una gota de agua sobre un portaobjetos, una pequeña porción de sarro dentario tomada con la aguja y con esto se hace una extensión o frotis que se seca a la llama del mechero. Se coloca el portaobjetos en el soporte de tinciones y se tiñe según la técnica de Gram.
Rhizobium leguminosarum: Nodulos de leguminosas: trebol, soya, alfalfa. Gram negativas
Acetobacter aceti: Telita que se forma sobre el vinagre. Gram negativa.
Lactobacilus vulgaris: Yogurt. Gram positiva
Informe de resultados
Los resultados de una tinción de gram se reportan como sigue:
- Forma bacteriana
- Coloración
- Agrupación bacteriana (escasa, media, abundante)
- En muestras de esputo, excretas, saliva o "pus" se considera la respuesta leucocitaria y su tipo (polimorfonuclear o monocitos) así como el conteo de células epitealiales a 10X.
La flora bacteriana observada por tinción de gram se informa por género, forma o agrupación, pero nunca por especie, ya que la identificación solo se puede lograr mediante pruebas bioquímicas
