PRÁCTICA 9: Núcleo
INTRODUCCION:
En la sesión se busca promover el desarrollo de habilidades para la observación del núcleo, reconociendo la heterocromatina y la eucromatina, así como los corpúsculos de Barr. Para el reporte de práctica se recomienda investigar el marco de referencia teórico de la sesión.
Competencia: Comparar los métodos utilizados para la identificación de orgánelos en tejidos multicelulares, con base en la utilización de técnicas básicas, para su posterior aplicación en el campo profesional, con disciplina y respeto.
Materiales y equipos
Portaobjetos
Cubreobjetos
Aceto-orceina
Hisopos
¿Qué debe llevar al laboratorio?
Disposición a efectuarse un raspado interno de la boca con un portaobjetos, así como donar muestras a los compañeros
Botella de agua potable, para enjuagarse la boca.Microscopio compuesto y papel para limpiar microscopio
Metodología:
Tinción con aceto/orceina
1) Los portaobjetos limpios, colocados en alcohol al 95% se marcan para identificar al donador de la muestra, adicionalmente indicando si se trata del lado derecho (D) o izquierdo (I) de la boca.
2) La boca se enjuaga con agua
3) Con el hisopo se hace un raspado suave de la mucosa bucal marcando el primer material obtenido.
4) Posteriormente se realiza un segundo raspado suave sin lesionar la mucosa y se extiende sobre el portaobjeto procurando que el frotis no quede demasiado delgado. Rápidamente, para evitar que se seque la preparación, se procede a la fijación y a la tinción.
5) En el portaobjetos que contiene el frotis de la mucosa bucal se deja caer 1 gota de solución de aceto-orceína en el centro de la preparación y se coloca un cubre objeto.
6) Buscando eliminar el excedente de colorante y distribuir la muestra, se coloca un papel filtro y se hace una ligera presión con el pulgar de un extremo al otro del portaobjeto.
7) La observación de la preparación debe hacerse de inmediato. Es importante utilizar adecuadamente la iluminación Köheler, el juego con la profundidad de campo y el adecuado manejo del micrómetro.
8) Identifique el núcleo, la heterocromatina, la eucromatina y en su caso el corpúsculo de Barr
Los cuerpos de Barr pueden teñirse mediante una gran cantidad de colorantes como tionina, hematoxilina, verde de metilo y con la técnica de Feulgen seguida por una hidrólisis ácida. El método más sencillo y utilizado a menudo es el frotis de mucosa obtenido por un raspado suave de la mucosa de la boca, extendida en la laminilla y luego teñida. Por lo general, se analizan al microscopio entre 50 y 100 células, debido a que la cromatina X se observa con menor frecuencia en este tipo de tejido.
Estructuras del nùcleo
En la imagen del lado derecho son señalados los corpusculos de barr.
